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分享一下如何正确选择CST抗体的方法
发布时间:2019-01-07   点击次数:372次
   今天就给大家分享一下关于如何正确选择CST抗体的方法,下面我们就一起来看看吧。

  正确选择CST抗体一般需要如下几个方面的信息:

  1)蛋白的名称及亚型:某些蛋白具有多种不同的亚型,如IKK、PKC、p38等,这需要在选择抗体之前确定要研究的蛋白亚型。还有些抗体由于其抗原选择的是不同蛋白亚型共有的肽段区域,是可以同时识别多个亚型的,我们一般都会在抗体的名称中加入(pan)字样来标明,如Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691,就可以识别Akt1、2、3等多个亚型,结果反映的也是所有Akt亚型的总水平。

  2)磷酸化修饰位点:由于CST抗体有很多是针对蛋白的磷酸化修饰位点,因此CST抗体的命名往往会在蛋白名称后加上括号来标注,如Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451,Ser65即此抗体识别的修饰位点,在选择合适的CST抗体用于特定修饰位点研究时,需要特别注意。有关不同修饰位点的功能,可以通过查阅文献确定,也可以通过点击CST该产品页面中的Background(背景知识)来获取。另外,由于有的蛋白存在不同亚型且序列高度同源,而不同亚型的某些磷酸化修饰位点周围的序列完全相同,因此CST的某些抗体往往会同时识别不同亚型的相似修饰位点,如Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb #2697既可识别Ser176位点磷酸化的IKKα,也可以识别Ser180位点磷酸化的IKKβ,结果反映的也是两者共有的水平。

  3)抗体已验证的应用(如WB,IHC,IP等):CST抗体一般会在出厂前对常见的抗体应用(WB,IHC,IP, ChIP,IF,Flow)进行内部验证,以确定可以满足的不同应用要求。通过验证,达到质检要求的抗体会明确标记,以备参考。一些没有标明的应用,往往是因为经过验证没有达到质检标准而不推荐。比如Acetyl-Histone H3 (Lys18) (D8Z5H) Rabbit mAb #13998可以满足除IF以外的所有其他5种应用,有的客户会认为,既然该抗体可以用于IHC,根据经验推断应该可以用于IF,那么很有可能会浪费很多时间和试剂而不能获得结果。也有一些没有标明的应用,可能是因为我们没有用于检测的样本而没有检测CST不推荐您使用没有标明的应用。可以挑选其他的货号,我们可能有适用于这个应用的更好的其它产品。

  另外,一般直接带有偶联物的一抗,只能用于特定的应用,也会明确标记。

  4)抗体能够识别的样本种属:CST抗体一般会在出厂前对常见的不同种属目标样本进行内部验证,以确定可以满足的不同种属类型,可以在产品页面的Species-Reactivity一栏中看到(如人、小鼠、大鼠等)。通过验证,达到质检要求的种属会明确标记,以备参考。对于有些抗体,在 Species-Reactivity 的种属里,有些种属会加上括号,这表示根据序列同源比对,是100%符合的,但是我们并没有做过关于这些种属的实验,所以不建议使用。

  一些没有标明的种属,也有可能是可以应用的,建议通过联系CST技术支持来获得相关抗原序列比对的信息,以确定是否可以用于该种属的样本。

  5)CST制备抗体的抗原:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片段、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,CST抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片段或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。不同类型的抗原对所得到的抗体会对其应用产生一定影响。CST科学家一般都会对抗体制备所用的抗原进行说明,并对抗体的各种常规应用在出厂前进行验证,以确定该抗体能够满足的应用。

  6)抗体的动物来源:CST一抗(primary antibody)的动物来源多为兔(rabbit)和小鼠(mouse),动物来源和单/多抗信息可通过产品名称和产品页面或说明书的Source / Purification得到。由于很多抗体的应用(如IHC,IF等)需要通过第二抗体(二抗)的进一步结合和信号放大,而抗体是通过特定抗原免疫动物而获得,产生抗体的动物来源也决定着第二抗体的选择。一般说来,在使用无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,好选兔源的一抗。

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