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正确选择CST抗体的方法分享
发布时间:2019-09-12   点击次数:86次
   正确选择CST抗体一般需要如下几个方面的信息:

  1)蛋白的名称及亚型:某些蛋白具有多种不同的亚型,如IKK、PKC、p38等,这需要在选择抗体之前确定要研究的蛋白亚型。还有些抗体由于其抗原选择的是不同蛋白亚型共有的肽段区域,是可以同时识别多个亚型的,我们一般都会在抗体的名称中加入(pan)字样来标明,如Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691,就可以识别Akt1、2、3等多个亚型,结果反映的也是所有Akt亚型的总水平。

  2)磷酸化修饰位点:由于CST抗体有很多是针对蛋白的磷酸化修饰位点,因此CST抗体的命名往往会在蛋白名称后加上括号来标注,如Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451,Ser65即此抗体识别的修饰位点,在选择合适的CST抗体用于特定修饰位点研究时,需要特别注意。有关不同修饰位点的功能,可以通过查阅文献确定,或登陆http://www。phosphosite。org(目前最全的蛋白修饰位点数据库)查询,也可以通过点击CST网站该产品页面中的Background(背景知识)来获取。另外,由于有的蛋白存在不同亚型且序列高度同源,而不同亚型的某些磷酸化修饰位点周围的序列完全相同,因此CST的某些抗体往往会同时识别不同亚型的相似修饰位点,如Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb #2697既可识别Ser176位点磷酸化的IKKα,也可以识别Ser180位点磷酸化的IKKβ,结果反映的也是两者共有的水平。

  3)抗体已验证的应用(如WB,IHC,IP等):CST抗体一般会在出厂前对常见的抗体应用(WB,IHC,IP, ChIP,IF,Flow)进行内部验证,以确定可以满足的不同应用要求。通过验证,达到质检要求的抗体会明确标记,以备参考。一些没有标明的应用,往往是因为经过验证没有达到质检标准而不推荐。比如Acetyl-Histone H3 (Lys18) (D8Z5H) Rabbit mAb #13998可以满足除IF以外的所有其他5种应用,有的客户会认为,既然该抗体可以用于IHC,根据经验推断应该可以用于IF,那么很有可能会浪费很多时间和试剂而不能获得结果。也有一些没有标明的应用,可能是因为我们没有用于检测的样本而没有检测CST不推荐您使用没有标明的应用。可以挑选其他的货号,我们可能有适用于这个应用的更好的其它产品。

  另外,一般直接带有偶联物的一抗,只能用于特定的应用,也会明确标记。

北京pk10玩法攻略  4)抗体能够识别的样本种属:CST抗体一般会在出厂前对常见的不同种属目标样本进行内部验证,以确定可以满足的不同种属类型,可以在产品页面的Species-Reactivity一栏中看到(如人、小鼠、大鼠等)。通过验证,达到质检要求的种属会明确标记,以备参考。对于有些抗体,在 Species-Reactivity 的种属里,有些种属会加上括号,这表示根据序列同源比对,是100%符合的,但是我们并没有做过关于这些种属的实验,所以不建议使用。

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